Բակտերիաների ուսումնասիրությունը մեծ գործնական նշանակություն ունի մարդկանց համար։ Մինչ օրս հայտնաբերվել են մեծ քանակությամբ պրոկարիոտներ, որոնք միմյանցից տարբերվում են ախտածինությամբ, տարածման տարածքով, ձևով, չափերով, դրոշակների քանակով և այլ պարամետրերով։ Այս շտամը մանրամասն ուսումնասիրելու համար օգտագործվում է մանրէաբանական հետազոտության մեթոդ։
Որո՞նք են բակտերիալ բջիջների վերլուծության մեթոդները:
Բակտերիաների պաթոգեն լինելը որոշելու համար մշակույթը հետազոտվում է տարբեր ձևերով: Դրանց թվում՝
1. Բակտերիոսկոպիկ մեթոդ.
2. Մանրէաբանական մեթոդ.
3. Կենսաբանական մեթոդ.
Բակտերիոսկոպիկ և մանրէաբանական հետազոտության մեթոդները հիմնված են ուղղակիորեն պրոկարիոտ բջիջների հետ աշխատանքի վրա, երբ կենսաբանական անալիզ է պահանջվում՝ ուսումնասիրելու նման բջիջների ազդեցությունը փորձարարական կենդանիների կենդանի օրգանիզմի վրա: Ըստ հիվանդության որոշակի նշանների դրսևորման աստիճանի՝ գիտնականը կարող է կատարելեզրակացություն նմուշում պաթոգեն բակտերիաների առկայության կամ բացակայության մասին, ինչպես նաև կենդանու օրգանիզմում դրանք բնականորեն տարածելու՝ դրանց կուլտուրա ստանալու և այլ աշխատանքներում օգտագործելու համար։
Հետազոտության մանրէաբանական մեթոդը տարբերվում է բակտերիոսկոպիկից. Առաջինում վերլուծության համար օգտագործվում է կենդանի պրոկարիոտների հատուկ պատրաստված կուլտուրա, իսկ երկրորդում՝ մահացած կամ կենդանի բջիջների հետ աշխատանքը ապակե սլայդի վրա։։
Մանրէաբանական հետազոտության մեթոդի փուլերը. Մանրէաբանություն
Բակտերիալ մշակույթի հատկությունների ուսումնասիրության սկզբունքը կարող է օգտակար լինել ինչպես միկրոկենսաբանների համար, ովքեր նպատակ են դրել ուսումնասիրել պրոկարիոտային բջիջները, այնպես էլ լաբորատոր տեխնիկների համար, որոնց խնդիրն է հաստատել բակտերիաների պաթոգեն կամ ոչ ախտածինությունը, և ապա ախտորոշեք հիվանդին։
Բակտերիաների ուսումնասիրության մեթոդը բաժանված է երեք փուլի.
1. Բակտերիաների մեկուսացում սկզբնական նմուշից։
2. Բակտերիաների ցանում և մաքուր կուլտուրա աճեցում՝ ուսումնասիրելով դրա հատկությունները։
3. Բակտերիալ բջիջների մանրամասն ուսումնասիրություն.
Առաջին փուլ
Նմուշը կամ քսուքը վերցվում է միջավայրի ազատ մակերեսից կամ հիվանդից: Այսպիսով, մենք ստանում ենք բազմաթիվ տեսակի բակտերիաների «կոկտեյլ», որոնք պետք է ցանվեն սննդարար միջավայրի վրա։ Երբեմն հնարավոր է դառնում անհապաղ մեկուսացնել անհրաժեշտ բակտերիաները՝ իմանալով դրանց տարածման օջախները մարմնում։
Երկու-երեք օր հետո ընտրվում են ցանկալի գաղութները ևցանվում են Պետրիի ամանների պինդ միջավայրերի վրա՝ ստերիլ օղակի օգնությամբ։ Շատ լաբորատորիաներ աշխատում են փորձանոթներով, որոնք կարող են պարունակել պինդ կամ հեղուկ սննդանյութեր: Այսպես է իրականացվում մանրէաբանության հետազոտության մանրէաբանական մեթոդը։
Երկրորդ փուլ
Բակտերիաների առանձին գաղութներ ստանալուց հետո կատարվում է ուղղակի մակրո և միկրովերլուծություն։ Չափվում են գաղութների բոլոր պարամետրերը, որոշվում է նրանցից յուրաքանչյուրի գույնն ու ձևը։ Հազվադեպ չէ գաղութները հաշվել Պետրիի ճաշատեսակի վրա, այնուհետև սկզբնական նյութում: Սա կարևոր է ախտածին բակտերիաների վերլուծության ժամանակ, որոնց թիվը կախված է հիվանդության աստիճանից։
Հետազոտության մանրէաբանական մեթոդը, որի 2-րդ փուլը միկրոօրգանիզմների առանձին գաղութների ուսումնասիրությունն է, կարելի է կապել բակտերիաների վերլուծության կենսաբանական մեթոդի հետ։ Այս փուլում աշխատելու մեկ այլ նպատակ է աղբյուր նյութի քանակի ավելացումն է։ Սա կարելի է անել սննդարար միջավայրի վրա, կամ կարող եք փորձարկել կենդանի փորձարարական օրգանիզմների վրա in vivo: Պաթոգեն բակտերիաները կբազմապատկվեն, և արդյունքում արյունը կպարունակի միլիոնավոր պրոկարիոտ բջիջներ։ Վերցված արյունից հեշտ է պատրաստել բակտերիաների անհրաժեշտ աշխատանքային նյութը։
Երրորդ փուլ
Ուսումնասիրության ամենակարևոր մասը բակտերիալ մշակույթի ձևաբանական, կենսաքիմիական, թունավոր և հակագենային հատկությունների որոշումն է: Աշխատանքն իրականացվում է նախապես մաքրված կուլտուրաներով սննդային միջավայրի վրա, ինչպես նաև մանրադիտակի տակ գտնվող պատրաստուկներով (հաճախ ներկված):
Սահմանել սեփականության իրավունքըպաթոգեն կամ պատեհապաշտ բակտերիաները այս կամ այն համակարգային խմբին, ինչպես նաև դեղերի նկատմամբ նրանց դիմադրողականությունը որոշելը թույլ է տալիս հետազոտության մանրէաբանական մեթոդը: Փուլ 3 - հակաբիոտիկներ, այսինքն՝ բակտերիալ բջիջների վարքագծի վերլուծություն շրջակա միջավայրում դեղերի պարունակության պայմաններում:
Մշակույթի հակաբիոտիկ դիմադրության ուսումնասիրությունը մեծ գործնական նշանակություն ունի, երբ անհրաժեշտ է նշանակել անհրաժեշտ, և ամենակարևորը, արդյունավետ դեղամիջոցները կոնկրետ հիվանդի համար: Ահա թե որտեղ կարող է օգնել մանրէաբանական հետազոտության մեթոդը։
Ի՞նչ է աճի միջավայրը:
Զարգացման և վերարտադրության համար բակտերիաները պետք է լինեն նախապես պատրաստված սննդարար միջավայրում: Ըստ հետևողականության՝ դրանք կարող են լինել հեղուկ կամ պինդ, իսկ ըստ ծագման՝ բուսական կամ կենդանական։
Հիմնական մեդիա պահանջներ՝
1. Ստերիլություն.
2. Առավելագույն թափանցիկություն։
3. Թթվայնության, օսմոտիկ ճնշման, ջրի ակտիվության և այլ կենսաբանական արժեքների օպտիմալ ցուցանիշներ։
Ստանալով մեկուսացված գաղութներ
1. Դրիգալսկու մեթոդ. Այն բաղկացած է նրանից, որ բակտերիալ հանգույցի վրա կիրառվում է տարբեր տեսակի միկրոօրգանիզմների քսուք: Այս օղակը փոխանցվում է առաջին Պետրի ճաշատեսակի երկայնքով սննդարար միջավայրով: Այնուհետև, առանց հանգույցը փոխելու, մնացորդային նյութի մեթոդը կատարվում է երկրորդ և երրորդ Petri ճաշատեսակների վրա: Այսպիսով, գաղութի վերջին նմուշների վրա բակտերիաները շատ խիտ չեն սերմանվի՝ դրանով իսկ հեշտացնելով աշխատանքի համար անհրաժեշտը գտնելու ունակությունը։բակտերիաներ.
2. Կոխ մեթոդ. Այն օգտագործում է փորձանոթներ՝ հալած սննդարար միջավայրով: Այնտեղ տեղադրվում է բակտերիաների քսուքով օղակ կամ պիպետ, որից հետո փորձանոթի պարունակությունը լցվում է հատուկ ափսեի վրա։ Ագարը (կամ ժելատինը) որոշ ժամանակ անց ամրանում է, և դրա հաստության մեջ հեշտ է գտնել ցանկալի բջջային գաղութները։ Աշխատանքն սկսելուց առաջ կարևոր է մանրէների խառնուրդը նոսրացնել փորձանոթներում, որպեսզի միկրոօրգանիզմների կոնցենտրացիան շատ բարձր չլինի։
Հետազոտության մանրէաբանական մեթոդը, որի փուլերը հիմնված են բակտերիաների ցանկալի մշակույթի մեկուսացման վրա, չի կարող առանց մեկուսացված գաղութների հայտնաբերման այս երկու մեթոդների:
Հակաբիոգրամ
Տեսողականորեն բակտերիաների արձագանքը դեղամիջոցներին կարելի է տեսնել երկու գործնական եղանակով.
1. Թղթային սկավառակի մեթոդ:
2. Բակտերիաների և հակաբիոտիկների բուծում հեղուկ միջավայրում:
Թղթային սկավառակի մեթոդը պահանջում է միկրոօրգանիզմների մշակույթ, որոնք աճեցվել են պինդ սննդային միջավայրի վրա: Նման միջավայրի վրա դրեք հակաբիոտիկներով թաթախված մի քանի կտոր կլորացված թուղթ։ Եթե դեղամիջոցը հաջողությամբ հաղթահարում է բակտերիալ բջիջների չեզոքացումը, ապա նման բուժումից հետո կհայտնվի գաղութներից զուրկ տարածք: Եթե հակաբիոտիկի նկատմամբ արձագանքը բացասական է, բակտերիաները կպահպանվեն:
Հեղուկ սնուցող միջավայր օգտագործելու դեպքում նախ պատրաստեք մի քանի փորձանոթներ՝ տարբեր նոսրացումների բակտերիաների կուլտուրայով: Այդ փորձանոթներին ավելացվում են հակաբիոտիկներ, օրվա ընթացքում նկատվում է նյութի ու միկրոօրգանիզմների փոխազդեցության գործընթացը։ Արդյունքում ստացվում է բարձրորակ հակաբիոգրամ, ըստ որի հնարավոր էդատեք դեղամիջոցի արդյունավետությունը տվյալ բերքի համար:
Վերլուծության հիմնական առաջադրանքները
Այստեղ թվարկված են հետազոտության մանրէաբանական մեթոդի նպատակներն ու փուլերը։
1. Ստացեք սկզբնական նյութը, որը կօգտագործվի բակտերիաների գաղութները մեկուսացնելու համար: Դա կարող է լինել ցանկացած առարկայի, լորձաթաղանթի կամ մարդու օրգանի խոռոչի քսուք, արյան անալիզ։
2. Մշակույթի մշակումը պինդ սննդային միջավայրի վրա: 24-48 ժամ հետո Պետրի ճաշատեսակի վրա կարելի է գտնել տարբեր տեսակի բակտերիաների գաղութներ։ Մենք ընտրում ենք ցանկալին ըստ մորֆոլոգիական և/կամ կենսաքիմիական չափանիշների և հետագա աշխատանք տանում դրա հետ։
3. Ստացված մշակույթի տարածումը. Մանրէաբանական հետազոտության մեթոդը կարող է հիմնված լինել բակտերիալ կուլտուրաների քանակի ավելացման մեխանիկական կամ կենսաբանական մեթոդի վրա։ Առաջին դեպքում աշխատանքն իրականացվում է պինդ կամ հեղուկ սնուցող միջավայրերով, որոնց վրա բակտերիաները բազմանում են թերմոստատում և ձևավորում նոր գաղութներ։ Կենսաբանական մեթոդը բնական պայմաններ է պահանջում բակտերիաների քանակի ավելացման համար, ուստի այստեղ փորձարարական կենդանին վարակվում է միկրոօրգանիզմներով։ Մի քանի օր անց արյան նմուշում կամ քսուքում շատ պրոկարիոտներ կարող են հայտնաբերվել:
4. Աշխատեք մաքրված մշակույթի հետ: Բակտերիաների համակարգված դիրքը, ինչպես նաև դրանց պատկանելությունը պաթոգեններին որոշելու համար անհրաժեշտ է բջիջների մանրակրկիտ վերլուծություն կատարել՝ ըստ մորֆոլոգիական և կենսաքիմիական բնութագրերի: Միկրոօրգանիզմների պաթոգեն խմբերն ուսումնասիրելիս կարեւոր է իմանալորքանո՞վ են արդյունավետ հակաբիոտիկները:
Սա մանրէաբանական հետազոտության մեթոդի ընդհանուր բնութագիրն էր։
Վերլուծության առանձնահատկությունները
Մանրէաբանական հետազոտության հիմնական կանոնը առավելագույն ստերիլությունն է։ Եթե դուք աշխատում եք փորձանոթների հետ, մանրէների մշակույթներն ու ենթամշակույթները պետք է իրականացվեն միայն տաքացվող սպիրտային լամպի վրա:
Մանրէաբանական հետազոտության մեթոդի բոլոր փուլերը պահանջում են հատուկ օղակի կամ Պաստերի պիպետտի օգտագործումը: Երկու գործիքներն էլ պետք է նախապես մշակվեն ալկոհոլային լամպի կրակի մեջ: Ինչ վերաբերում է Pasteur pipette-ին, ապա այստեղ ջերմային ստերիլիզացումից առաջ անհրաժեշտ է պինցետով կոտրել պիպետտի ծայրը։
Բակտերիաների սերմանման տեխնիկան նույնպես ունի իր առանձնահատկությունները. Նախ, պինդ միջավայրի վրա պատվաստելիս բակտերիալ օղակ է անցնում ագարի մակերեսի վրայով: Օղակը, իհարկե, արդեն պետք է մակերեսի վրա ունենա միկրոօրգանիզմների նմուշ: Կիրառվում է նաև պատվաստում կուլտուրայի մեջ, որի դեպքում օղակը կամ խողովակը պետք է հասնի Պետրի ափսեի հատակին:
Հեղուկ միջավայրի հետ աշխատելիս օգտագործվում են փորձանոթներ: Այստեղ կարևոր է ապահովել, որ հեղուկները չդիպչեն լաբորատոր ապակյա սպասքի կամ խցանների եզրերին, իսկ օգտագործվող գործիքները (պիպետտ, օղակ) չդիպչեն օտար առարկաներին և մակերեսներին:
Կենսաբանական հետազոտության մեթոդի կարևորությունը
Բակտերիաների նմուշի վերլուծությունն ունի իր գործնական կիրառությունը: ՀիմնականումՄանրէաբանական հետազոտության մեթոդը կարող է կիրառվել բժշկության մեջ։ Օրինակ՝ անհրաժեշտ է ուսումնասիրել հիվանդի միկրոֆլորան՝ ճիշտ ախտորոշումը հաստատելու, ինչպես նաև բուժման ճիշտ ընթացքը մշակելու համար։ Այստեղ օգնում է հակաբիոգրամը, որը ցույց կտա պաթոգենի դեմ դեղամիջոցների ակտիվությունը։
Բակտերիաների անալիզն օգտագործվում է լաբորատորիայում վտանգավոր հիվանդություններ հայտնաբերելու համար, ինչպիսիք են տուբերկուլյոզը, ռեցիդիվ ջերմությունը կամ գոնորեան: Այն նաև օգտագործվում է նշագեղձերի, օրգանների խոռոչների բակտերիալ բաղադրությունը ուսումնասիրելու համար։
Մանրէաբանական հետազոտության մեթոդը կարող է օգտագործվել շրջակա միջավայրի աղտոտվածությունը որոշելու համար։ Ըստ օբյեկտի մակերեսից քսուքի քանակական և որակական բաղադրության տվյալների՝ որոշվում է այս միջավայրի պոպուլյացիայի աստիճանն ըստ միկրոօրգանիզմների։
