Հեպատիտ C-ն լյարդի վարակ է, որն առաջանում է Flaviviridae HCV վիրուսով, որը բաղկացած է մեկ կամ մի քանի ՌՆԹ մոլեկուլներից: Որպես կանոն, հիվանդի մոտ հեպատիտ C-ի հաստատման համար իրականացվում են մի շարք ախտորոշիչ միջոցառումներ, ՊՇՌ-ն ախտորոշումը ճշգրիտ հաստատող անալիզ է։ Հաճախ եզրակացությունը տալիս են բժիշկները, երբ հիվանդն արդեն ունի հիվանդության առաջին նշանները։
Ի՞նչ է հեպատիտ C
Լյարդի վնասումը վիրուսային վարակի պատճառով, որը փոխանցվում է արյան կամ սեռական շփման միջոցով, բժշկության մեջ կոչվում է հեպատիտ C: Պատճառական գործակալը Flaviviridae ընտանիքի ոչ բջջային վարակիչ նյութերի ՌՆԹ պարունակող վիրուսն է: Ինֆեկցիան կարող է երկար ժամանակ մնալ օրգանիզմում՝ չդրսեւորելով իրեն։ Հետևաբար, միայն այն դեպքում, երբ միկրոօրգանիզմը հայտնաբերվում է արյան թեստի միջոցով՝ օգտագործելով PCR RNA RNA, հեպատիտ C-ն (որպես ախտորոշում) համարվում է արդարացված:
Ֆլավիվիրուսը չի արտադրվում արհեստականորեն աճեցված մեկուսացված բջիջներում: Վերարտադրման գործընթացում վարակիչ նյութը իմունոլոգիական հստակ փոփոխություններ է առաջացնում: Այս գործոնները խանգարում են մարմնին տալհամապատասխան պաշտպանիչ պատասխան, և փորձագետները դժվարանում են արդյունավետ պատվաստանյութ մշակել:
Վիրուսը փոխանցվում է պարենտերալ ճանապարհով։ Վարակման համար այն պետք է բավականաչափ քանակությամբ մտնի անմիջապես արյան մեջ։
Ինչ անալիզներ են արվում հեպատիտ C-ի համար
Լյարդի վիրուսային պաթոլոգիաները ախտորոշվում են լաբորատոր թեստերի միջոցով։ Հեպատիտ C-ի կլինիկական հետազոտություններն իրականացվում են հիվանդի կենսանյութում, հիմնականում արյան մեջ օտար և վտանգավոր անտիգենների կամ սպիտակուցային միացությունների (հակամարմինների) ուսումնասիրությամբ։
- Ֆերմենտային իմունովերլուծություն (ELISA): Մեթոդը հիմնված է արյան մեջ lgM հակամարմինների հայտնաբերման վրա։ Իմունոգոլոբուլինը համարվում է ամենամեծը և հնգտամեր է: Այն արտահայտվում է լիմֆոցիտների առաջնային պաշտպանիչ արձագանքով անհայտ օտար նյութի նկատմամբ:
- Radioimmunoassay (RIA) - lgM իմունոգլոբուլինի քանակական որոշում յոդի պիտակավորված ռադիոակտիվ իզոտոպի միջոցով:
- Հեպատիտ C-ի ՊՇՌ - վիրուսային ՌՆԹ-ի որոշում կենսանյութում (արյան մեջ): Այս անալիզը հուսալիորեն հաստատում է ախտորոշումը։
IgG թեստը հուսալի չէ: Արյան շիճուկում դրա առկայությունը կարող է վկայել ոչ միայն ֆլավիվիրուսի, այլև անցյալի մեկ այլ վարակի մասին, որն ունի նույն հարուցիչը:
Ինչն է որոշում PCR վերլուծությունը
Պոլիմերազային շղթայական ռեակցիան (ՊՇՌ) հիմնված է հետազոտության համար նախատեսված նյութի նմուշներում (էպիթել, արյուն) որոշ պաթոգենների համար հատուկ ԴՆԹ շրջանների նույնականացման վրա:Վերլուծությունը թույլ է տալիս բացահայտել պաթոգեն ամենափոքր օրգանիզմները (վիրուսները)՝ հայտնաբերելով դրանց ՌՆԹ-ն կամ ԴՆԹ-ն կենսաբանական նյութում։
Հակամարմինների հայտնաբերման լաբորատոր պրոցեդուրան Հեպատիտ C-ի ՊՇՌ-ն իրականացվում է 3 փուլով՝
- Ընտրեք. Ուսումնասիրված կենսանյութը մաքրվում է կեղտից և ԴՆԹ-ն ստացվում է քրոմատոգրաֆիկ սյունակի շարժական փուլում։
- ուժեղացում. Վերլուծությունը կատարվում է սարք-թերմոստատ ցիկլերում։ Այն տաքացնում և սառեցնում է փորձանոթները որոշակի ցիկլայնությամբ։ Մեկ ուսումնասիրության համար կատարվում է մինչև 35 ցիկլ: Արդյունքը բավական քանակությամբ ԴՆԹ-ի բեկորներ է պաթոգենը հայտնաբերելու, բացահայտելու և գնահատելու համար:
- էլեկտրոֆորեզ. Ստացված բեկորները տեղադրվում են ագարոզով տարբեր հագեցվածությամբ գելի մեջ և կատարվում է էլեկտրոֆորեզ։ Ստացված էլեկտրոֆերոգրամը վերլուծվում է համակարգչով։
Օգտագործվում է ոչ միայն ստանդարտ PCR ուսումնասիրությունը, այլև իրական ժամանակում PCR վերլուծությունը: Սա իրական ժամանակի ախտորոշում է: Մեթոդը թույլ է տալիս որակական և քանակական վերլուծություն, ինչը հնարավորություն է տալիս բացահայտել հիվանդության ձևավորումն ու դինամիկան, ինչպես նաև նշանակել թերապիա՝ ուղղված պաթոլոգիայի ծագման պատճառի վերացմանը: Իրական ժամանակի PCR-ն օգտագործվում է նաև վարակիչ նյութերի մաքուր կուլտուրա որոշելու համար (գենոտիպավորում):
Ինչպես է կատարվում պոլիմերազային շղթայական ռեակցիայի թեստը
Ախտորոշման համար կարող է օգտագործվել ցանկացած մարդու կենսաբանական հեղուկ: Հեպատիտ C-ի ախտորոշման կենսանյութը սովորաբար արյունն է։
Ախտորոշման համար նմուշառումն իրականացվում է ընթացակարգովգրասենյակ. Արյուն վերցնելու համար օգտագործեք միանգամյա օգտագործման փորձանոթներ այնպիսի նյութով, որը խանգարում է արյան մակարդմանը: Վարակիչ նյութերի տարածումը կանխելուն ուղղված գործողությունները օգնում են խուսափել արտաքինից միկրոօրգանիզմների մեկ այլ շտամի մուտքից:
Հեպատիտ C-ի ՊՇՌ-ի համար արյունը վերցվում է առավոտյան դատարկ ստամոքսին: Նմուշն անմիջապես ուղարկվում է լաբորատորիա։ Թույլատրվում է կենսանյութը պահել +4-ից +8 աստիճան Ցելսիուսի ջերմաստիճանում։ Բեռնարկղերը պիտակավորված են և տրված են ուղղություններով: Թեստի արդյունքները հասանելի են 48 ժամվա ընթացքում, երբեմն՝ ավելի շուտ։
PCR-ի տեսակները
Պոլիմերազային շղթայական ռեակցիայի կիրառման շրջանակը բավականին լայն է։ Ինֆեկցիոնիստները որոշում են PCR հեպատիտ B-ի միջոցով, արյուն ծծող միջատներով փոխանցվող հիվանդությունները, ՁԻԱՀ-ը, տուբերկուլյոզը: Ուռուցքաբանության մեջ այս մեթոդի կիրառմամբ ուռուցքային բջիջները հայտնաբերվում են վաղ փուլում։
Անալիզի մոտ տասնչորս տեսակ կա: Այս կամ այն տեսակի օգտագործումը կախված է վերլուծությունների շրջանակից և վերջնական արդյունքներից: PCR-ի որոշ տեսակներ անփոխարինելի են, երբ արդյունքն անհրաժեշտ է 20 րոպեի ընթացքում:
Հեպատիտ C-ն ախտորոշելու համար օգտագործվում են պոլիմերազային շղթայական ռեակցիայի 3 տեսակ՝
- Որակական գնահատումը կարող է լինել կամ դրական՝ ցույց տալով օրգանիզմում վարակի առկայությունը, կամ բացասական՝ ցույց տալով ֆլավիվիրուսի բացակայությունը։
- Իրական ժամանակում PCR (քանակական վերլուծություն) - որոշում է հարուցչի քանակական ՌՆԹ-ն IU/ml-ով:
- Գենոտիպավորումը վերլուծություն է, որը բացահայտում է վիրուսի տեսակը (գենոտիպը):
Հիվանդությունը ճշգրիտ բացահայտելու և որոշելու համար, որին հաջորդում էԲոլոր երեք տեսակի հետազոտություններն օգտագործվում են օպտիմալ թերապիա նշանակելու համար:
Որակական պոլիմերազային շղթայական ռեակցիայի վերլուծություն
Վերլուծությունը պարտադիր է յուրաքանչյուրի համար, ով ունի ELISA, որը հայտնաբերել է HCV-ի դեմ հակամարմիններ: Հեպատիտ C-ի որակական PCR-ը զգայունության ստանդարտ թեստն է: Մեթոդն ուղղված է միայն հայտնաբերմանը, այլ նյութերի հաշվառում կամ մեկուսացում չի իրականացվում։
Հակամարմինները հայտնաբերելու համար օգտագործվում են հատուկ թեստային համակարգեր՝ առնվազն 50 IU/ml զգայունության շեմով: Հակամարմինների հայտնաբերման դեպքում նշանակվում են այլ պարզաբանող թեստեր: Եթե արդյունքը բացասական է, հետագա թեստավորում չի իրականացվի:
Որոշ դեպքերում կեղծ բացասական արդյունքը կարող է պայմանավորված լինել լաբորատորիայի ոչ կոմպետենտ անձնակազմի կամ անորակ ռեակտիվների պատճառով: Ապահովագրության համար ավելի լավ է վերլուծությունը նորից վերցնել այլ տեղ:
Քանակական PCR
Մեթոդն օգտագործվում է ուղղակիորեն ուսումնասիրելու ֆլավիվիրուսների քանակը մեկ ռեակցիայի ցիկլում: Ճշգրիտ չափումների համար օգտագործվում են հիբրիդացման համար օգտագործվող ԴՆԹ-ի բեկորներ կամ ֆլուորեսցենտային պիտակավորված այբբենարաններ: Կա SYBL Green ներկի օգտագործմամբ հայտնաբերման տնտեսական տարբերակ: Ներկը խրվում է ԴՆԹ-ի մի փոքրիկ ակոսի մեջ և լազերային ճառագայթման ժամանակ դառնում կապույտ։
Համակենտրոնացումը որոշվում է ապարատ-ուժեղացուցիչով թվային համարժեքով: Արժեքները կարող են մի փոքր տարբերվել լաբորատորիաների միջև և, հետևաբար, պետք է համեմատվեն հղման արժեքների հետ:
Քանակական ՊՇՌհեպատիտ C-ն օգնում է ընտրել դեղերի օպտիմալ դեղաչափը և որոշել թերապիայի տևողությունը: Հետազոտության հաճախականությունը կախված է հիվանդության փուլից, գենոտիպի տեսակից և բուժման նշանակված կուրսից։
Գենոտիպային որոշում
Հեպատիտ C-ի վիրուսն ունի փոփոխական գենետիկական կառուցվածք: Բազմաթիվ փոփոխությունները անհնարին են դարձնում պատվաստանյութի ստեղծումը, ինչպես նաև բարդացնում են թերապիան։ Ընդհանուր առմամբ հայտնաբերվել և արձանագրվել է 11 գենոտիպ և 100 ենթատեսակ: Նախկին ԽՍՀՄ երկրներում հեպատիտ C-ով վարակված մարդկանց մոտ ՊՇՌ-ն հիմնականում հայտնաբերում է 1b և 3 գենոտիպերը։
Գենոտիպերից որևէ մեկի առկայության դեպքում ցիռոզը կամ լյարդի քաղցկեղը կարող են զմայլվել: Այդ իսկ պատճառով այդքան կարևոր է ժամանակին հայտնաբերել վիրուսը։
Որոշ հիվանդների համար HCV-ի դեմ պայքարի համար նախատեսված որոշ դեղամիջոցներ թունավոր են: Գենոտիպավորումը թույլ է տալիս որոշել սպիտակուցի տեսակը և նշանակել արդյունավետ դեղամիջոց:
Տպագրական թեստերի արդյունքներում առկա է վիրուսի գենոտիպը ցույց տվող փոքրատառ լատինատառով թիվ։ Եթե HCV-ն հայտնաբերված է, բայց տպագրված չէ, դա նշանակում է, որ անձը ունի գենոտիպ, որը բնորոշ չէ որոշակի աշխարհագրական տարածքի համար:
Վերլուծության արդյունքներ
Արդյունքների վերծանմամբ զբաղվում է բժիշկը։ Միայն մի քանի ուսումնասիրությունների տվյալները (անամնեզի և հետազոտության հետ միասին) կարող են տալ բժշկական պատմության ընդհանուր իրական պատկերը:
- Առողջ մարդու մոտ կենսանյութի որակական ռեակցիայի թեստը ոչինչ չի հայտնաբերում։ Եթե նշված է «հայտնաբերված» արժեքը, վարակը հաստատվում է, իսկ հիվանդըկարիք ունի հետագա ախտորոշման, որին հաջորդում է բուժումը:
- Վարակիչ նյութերի քանակի որոշումը հնարավորություն է տալիս գնահատել օրգանիզմի վիրուսային բեռը։ Սովորաբար, հեպատիտ C-ի քանակական ՊՇՌ-ն չի հայտնաբերում հարուցիչը: Մինչև 810^5 ցուցանիշը համարվում է ցածր ծանրաբեռնվածություն և պատշաճ թերապիայի դեպքում երաշխավորում է բարենպաստ արդյունք: Ավելի բարձր արժեքները պահանջում են խորը հետազոտություն և երկարատև թերապիայի որոշում, որի դրական արդյունքի համար ոչ ոք չի կարող երաշխավորել։
- Գենոտիպավորման դրական արդյունքները ցույց են տալիս, թե որ գենոտիպն է ճանաչված: Բացասական արդյունքը ցույց է տալիս կամ ֆլավիվիրուսի բացակայությունը կամ գենոտիպի առկայությունը, որը բնորոշ չէ այս տարածաշրջանին:
Ինչ է ցույց տալիս դրական PCR թեստը
Ցանկացած լուրջ հիվանդություն պահանջում է համալիր ախտորոշում։ Հեպատիտ C-ի դրական PCR-ն հաստատում է ախտորոշումը, սակայն կանխատեսումներ կարելի է անել միայն լրացուցիչ լաբորատոր և գործիքային հետազոտություններից հետո:
Վիրուսի հայտնաբերումը չի տալիս պաթոլոգիայի ամբողջական պատկերը. Անհրաժեշտ է բացահայտել դրա տեսակն ու բնույթը, պարզել, թե ինչպես է այն ազդում լյարդի և այլ օրգանների վրա։ HCV-ի վաղ հայտնաբերումը հաճախ ունենում է բարենպաստ թերապևտիկ արդյունք:
Բացասական PCR դրական ELISA-ով
Լյարդի վնասմանը բնորոշ ախտանիշները դիտարկելիս մեծ է հավանականությունը, որ վարակն արդեն մտել է օրգանիզմ։ Հետեւաբար, դուք պետք է կապվեք հեպատոլոգի կամ վարակաբանի հետ: Հարցազրույցների ընթացքում մասնագետը կհավաքի անամնեզ և կնշանակի անհրաժեշտ հետազոտություն։
ԵթեՀեպատիտ C-ի PCR-ի վերաբերյալ ուսումնասիրությունների արդյունքները բացասական են, իսկ ֆերմենտային իմունովերլուծությունը դրական է, սա վկայում է արյան մեջ ֆլավիվիրուսի նկատմամբ հակամարմինների առկայության մասին: Սովորաբար դա տեղի է ունենում, երբ վարակը փոքր քանակությամբ ներթափանցում է օրգանիզմ, ուստի իմունային համակարգը ինքնուրույն հաղթահարել է այն: Բայց այդպիսի մարդիկ դեռ համարվում են վարակված և պահանջվում են հետազոտվել 6 ամիսը մեկ։ Եթե նման հետազոտության արդյունքներով մարդուն մերժում են անվճար բուժզննում անցնել, ապա ավելի լավ է առողջությունը պահպանելու համար վճարովի PCR, իսկ եթե արդյունքները դրական են, դիմեք մասնագետի ախտորոշման և բուժման համար։
Մեթոդի առավելություններն ու թերությունները
Հեպատիտ C-ի ախտորոշումը հաստատելիս ՊՇՌ-ն ունի մի քանի առավելություններ.
- Ախտածնի վաղ հայտնաբերում.
- Վիրուսի ճշգրիտ սահմանում.
- Ախտորոշման արդյունավետություն.
- Սխալի նվազագույն մակարդակ։
- Բարձր զգայունություն.
Մեթոդի թերությունները.
- Վերլուծության բարձր արժեքը: Թեստը պահանջում է թանկարժեք սարքավորումներ, ռեակտիվներ և բարձր որակավորում ունեցող բժշկական անձնակազմ: Բոլորը միասին կազմում են զգալի գումար։
- Կենսանյութի տեղափոխման խիստ պահանջներ.
Լյարդի բորբոքման բուժում
Հեպատիտ C վիրուսի PCR վերլուծությունը համարվում է ախտորոշման հիմնարար, բայց ոչ վերջնական: Որպեսզի թերապիան արդյունավետ լինի, անհրաժեշտ են մի շարք լրացուցիչ լաբորատոր և գործիքային հետազոտություններ: Բոլորն անցնելուց հետոախտորոշիչ միջոցառումներ բժիշկը նշանակում է բուժում՝
- Նշանակված է Դիետա 5։
- Ալկոհոլը լիովին բացառված է։
- Ինտերֆերոնի և Ռիբավիրինի համատեղ ընդունում 25 օրով։
- Հեպապրոտեկտորների դասընթաց «Essentiale», «Karsil», «Phosphogliv».
- Հատուկ դեպքերում օգտագործվում է դիսկրետ պլազմաֆերեզ:
Լյարդաբանի կողմից նշանակված դեղամիջոցներն օգտագործվում են կանոնավոր՝ առանց դեղաչափը փոխելու։ Դեղերի ընդունման տեւողությունը բժիշկը որոշում է հսկիչ թեստերն անցնելուց հետո։ Թերապիայի կուրսն ավարտելուց հետո վեց ամիսը մեկ պետք է այցելեք բժշկի։
PCR-ախտորոշումը թույլ է տալիս վաղ փուլում բացահայտել հեպատիտ C-ի հարուցիչը: Սա նպաստում է թերապիայի արդյունավետությանը և կանխարգելում է հիվանդության անցումը այնպիսի վտանգավոր ձևերի, ինչպիսիք են ցիռոզը և լյարդաբջջային քաղցկեղը:
