Վերջերս մշակվել է մարդու տարբեր վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման հուսալի, խիստ զգայուն և արագ մեթոդ։ Այս մեթոդը կոչվում է «PCR վերլուծություն»: Ինչ է այն, որն է դրա էությունը, ինչ միկրոօրգանիզմներ կարող է բացահայտել և ինչպես ճիշտ ընդունել, կպատմենք մեր հոդվածում։
Հայտնաբերման պատմություն
Հնարել է պոլիմերազային շղթայական ռեակցիայի (PCR) մեթոդը ամերիկացի գիտնական Քերի Մալիսի կողմից 1983 թվականին: Սկզբում ախտորոշման մեթոդը արտոնագրվել էր Cetus Corporation-ի կողմից, որտեղ աշխատում էր դրա ստեղծողը: Սակայն 1992 թվականին բոլոր իրավունքները և արտոնագրերը վաճառվեցին Հոֆման-Լա Ռոշին: Դրանից հետո պարզվել է, որ նմանատիպ ուսումնասիրություններն իրականացվել են զուգահեռաբար և արձանագրվել այլ ամերիկացի կենսաբանների կողմից՝ Էլիս Չենը, Դեյվիդ Էդգարը, Ջոն Թրելը։ 1980 թվականին այս խնդրով զբաղվել են նաև խորհրդային գիտնականներ Ա. Սլյուսարենկոն, Ա. Կալեդինը և Ս. Գորոդեցկին։ Ուստի անհնար էր որոշել հեղինակային իրավունքի միակ իրավատիրոջը։ Շատ նշանավոր կենսաքիմիկոսներ որոշակի ներդրում են ունեցել պոլիմերազային շղթայական ռեակցիայի տեխնիկայի զարգացման գործում և արտոնագրել են իրենց նորարարությունները։ Ներկայումս վերլուծությունըPCR-ն իրականացվում է ամենուր՝ հատուկ սարքավորված լաբորատորիաներում։
PCR ախտորոշման մեթոդի էությունը
PCR վերլուծություն. ինչ է դա և ինչպես է այն գործում: Մեթոդի էությունը արհեստական պայմաններում որոշակի մանրէաբանական միջավայրի ծավալի մեծացումն է՝ օգտագործելով հատուկ ԴՆԹ պոլիմերազային ֆերմենտ: Դրա համար գոյություն ունեցող ԴՆԹ նյութը բազմապատկվում է բազմիցս։ Այսպիսով, նմուշում պաթոգեն միկրոօրգանիզմի առկայության դեպքում դրա քանակությունը կավելանա կենսաքիմիական լաբորատոր մանիպուլյացիաների շնորհիվ, և մանրադիտակով մանրէը հայտնաբերելը դժվար չի լինի։
Ինչպե՞ս է կատարվում նյութական հետազոտությունը:
Պահանջվում է վերլուծության համար՝
- ԴՆԹ մատրիցա;
- պրայմերներ, որոնք միացնում են նյութի ծայրերը;
- ջերմակայուն ԴՆԹ պոլիմերազային ֆերմենտ;
- քիմիական նյութեր, որոնք ստիպում են ֆերմենտներին ճիշտ աշխատել;
- բուֆերային լուծույթ, որն անհրաժեշտ է ԴՆԹ նյութի աճի և զարգացման համար համապատասխան պայմաններ ստեղծելու համար:
ՊՇՌ-ն իրականացնելու համար կատարվում է 25-30 կրկնություն՝ բաղկացած երեք փուլից՝ դենատուրացիա, կռում և երկարացում։
Պոլիմերային շղթայական ռեակցիայի վերլուծության համար օգտագործվում է հատուկ սարք՝ ուժեղացուցիչ։ Ժամանակակից սարքավորումները թույլ են տալիս կարգավորել ջեռուցման և հովացման խողովակների համար անհրաժեշտ ծրագիրը՝ ախտորոշման ժամանակ սխալները վերացնելու համար:
Որտե՞ղ է օգտագործվում ախտորոշումը:
Պոլիմերային շղթայական ռեակցիայի մեթոդը կիրառվում է բժշկության տարբեր ոլորտներում.
- քրեականների հետայն նույնացնում է գենետիկական նյութը, ինչպիսիք են մազերը, թուքը կամ արյունը;
- PCR արյան թեստն օգնում է գենոտիպավորմանը, օրինակ՝ հայտնաբերելու առանձին գենետիկորեն բնորոշ ռեակցիա որոշակի դեղամիջոցի նկատմամբ;
- օգտագործելով այս մեթոդը մարդկանց միջև ընտանեկան կապերի առկայությունը հաստատելու համար;
- Ամենատարածված PCR մեթոդը դարձել է բժշկական ախտորոշման մեջ՝ տարբեր վարակիչ հիվանդությունների որոշման համար։
Ի՞նչ վարակներ է հայտնաբերում PCR-ը:
Այսպիսով, բժշկությունը երկար և հաջողությամբ օգտագործում է PCR անալիզը: Ինչ է դա, մենք արդեն գիտենք: Իսկ ի՞նչ հարուցիչներ կարելի է հայտնաբերել դրա հետ։ ՊՇՌ մեթոդով ախտորոշվում են հետևյալ վարակիչ հիվանդությունները՝.
- հեպատիտ A, B, C;
- ուրեապլազմոզ;
- candidiasis;
- քլամիդիա;
- միկոպլազմոզ;
- gardnerellosis;
- վարակիչ մոնոնուկլեոզ;
- տրիխոմոնիազ;
- պապիլոմավիրուսային վարակ;
- տուբերկուլյոզ;
- հերպեսի վարակի տիպեր 1 և 2;
- հելիկոբակտերիոզ;
- ցիտոմեգալովիրուս;
- դիֆթերիա;
- սալմոնելոզ;
- ՄԻԱՎ վարակ։
Նաև ՊՇՌ մեթոդներն օգտագործվում են քաղցկեղի ախտորոշման ժամանակ։
Մեթոդի առավելությունները
PCR ախտորոշումն ունի մի քանի առավելություններ՝
- Բարձր զգայունություն. Նույնիսկ միկրոօրգանիզմի ԴՆԹ-ի միայն մի քանի մոլեկուլների առկայության դեպքում ՊՇՌ անալիզը որոշում է վարակի առկայությունը: Մեթոդը կօգնի քրոնիկական և թաքնված հիվանդությունների դեպքում։ Հաճախ նման դեպքերում միկրոօրգանիզմըայլ կերպ անմշակ է։
- Ցանկացած նյութ հարմար է հետազոտության համար, ինչպիսիք են թուքը, արյունը, սեռական օրգանների սեկրեցները, մազերը, էպիթելային բջիջները: Ամենատարածվածը արյան և միզասեռական քսուքի անալիզն է ՊՇՌ-ի համար:
- Երկարատև բերքատվություն չի պահանջվում: Ավտոմատացված ախտորոշման գործընթացը թույլ է տալիս 4-5 ժամ հետո ստանալ հետազոտության արդյունքները։
- Մեթոդը գրեթե 100% հուսալի է: Արձանագրվել են կեղծ բացասական արդյունքների միայն առանձին դեպքեր:
- Մեկ նյութի նմուշից մի քանի տեսակի հարուցիչների նույնականացման ունակություն: Սա ոչ միայն արագացնում է հիվանդության ախտորոշման գործընթացը, այլեւ զգալիորեն նվազեցնում է նյութական ծախսերը: Հաճախ բժիշկը նշանակում է համապարփակ PCR վերլուծություն: Հետազոտության գինը, որը բաղկացած է վեց հարուցիչների որոշումից, կազմում է մոտ 1500 ռուբլի։
Անալիզի պատրաստվելու առաջարկություններ
Որպեսզի արդյունքները հուսալի լինեն PCR հետազոտության ընթացքում, անհրաժեշտ է թեստ հանձնել՝ հետևելով ախտորոշման նախնական նախապատրաստման առաջարկություններին.
- Մինչ թուք նվիրելը, նմուշառումից 4 ժամ առաջ դուք պետք է ձեռնպահ մնաք ուտելուց և դեղեր ընդունելուց: Պրոցեդուրայից անմիջապես առաջ բերանը ողողեք եռացրած ջրով։
- Վերոնշյալ կանոնները պետք է պահպանվեն նաև այտի ներքին մակերեսից նմուշ վերցնելիս։ Ողողվելուց հետո խորհուրդ է տրվում մաշկի թեթև մերսում կատարել՝ գեղձի արտազատումը ընդգծելու համար։
- Մեզը սովորաբար հավաքում են տանը։ Դա անելու համար հարկավոր է մանրակրկիտ զուգարան անցկացնելսեռական օրգաններ. Ստերիլ պլաստիկ տարայի մեջ հավաքեք 50-60 մլ մեզ։ Նյութի մաքրությունն ապահովելու համար կանանց խորհուրդ է տրվում տամպոն մտցնել հեշտոց, իսկ տղամարդկանց՝ հնարավորինս հետ քաշել մաշկի ծալքը։ Մի նվիրաբերեք դաշտանի ընթացքում:
- Սերմնահեղուկ նվիրաբերելու համար նմուշառումից 3 օր առաջ պետք է ձեռնպահ մնալ սեռական հարաբերությունից: Բժիշկները նաև խորհուրդ են տալիս չայցելել սաունա և տաք լոգանք ընդունել, ալկոհոլ և կծու սնունդ չօգտագործել։ Թեստից 3 ժամ առաջ պետք է ձեռնպահ մնաք միզելուց։
- Միզասեռական քսուք վերցնելու համար, օրինակ, եթե PCR թեստ է կատարվում քլամիդիոզի համար, և՛ կանանց, և՛ տղամարդկանց խորհուրդ է տրվում 3 օր սեռական հանգիստ ունենալ: Վերլուծությունից 2 շաբաթ առաջ հակաբակտերիալ դեղամիջոցներ չի կարելի ընդունել: Մեկ շաբաթով դուք պետք է դադարեցնեք ինտիմ գելերի, քսուքների, հեշտոցային մոմերի օգտագործումը, լվացումը: Հետազոտությունից 3 ժամ առաջ պետք է զերծ մնալ միզելուց։ Դաշտանի ժամանակ նմուշառում չի կատարվում, արյան արտանետումը դադարեցնելուց միայն 3 օր հետո կարելի է միզասեռական քսուք վերցնել։
PCR հղիության ընթացքում
Երեխայի սպասման ժամանակահատվածում սեռական ճանապարհով փոխանցվող բազմաթիվ վարակները չափազանց վտանգավոր են պտղի բնականոն զարգացման համար։ ՍՃՓՀ-ները կարող են առաջացնել ներարգանդային աճի դանդաղում, վիժում կամ վաղաժամ ծնունդ, երեխայի բնածին արատներ։ Ուստի չափազանց կարևոր է հղիության վաղ շրջանում ՊՇՌ հետազոտություն անցնելը։ Անհրաժեշտ է անալիզ անցնել գրանցման ժամանակ՝ մինչև 12 շաբաթ։
Նյութը վերցվում է արգանդի վզիկի ջրանցքից՝ հատուկ խոզանակի միջոցով։ Գործընթացը ցավազուրկ է և վտանգ չի ներկայացնում երեխայի համար։ Սովորաբար հղիության ընթացքում վերլուծություն է կատարվում քլամիդիոզի համար ՊՇՌ մեթոդով, ինչպես նաև ուրեապլազմոզի, միկոպլազմոզի, ցիտոմեգալովիրուսի, հերպեսի, պապիլոմավիրուսի համար։ Հետազոտությունների նման համալիրը կոչվում է PCR-6:
PCR ՄԻԱՎ-ի ախտորոշման համար
Պայմանավորված է նրանով, որ պոլիմերազային շղթայական ռեակցիայի մեթոդը շատ զգայուն է մարմնի փոփոխությունների և ախտորոշման պայմանների նկատմամբ, բազմաթիվ գործոններ կարող են ազդել արդյունքի վրա։ Հետևաբար, ՄԻԱՎ վարակի PCR վերլուծությունը հուսալի մեթոդ չէ, դրա արդյունավետությունը 96–98% է: Մնացած 2-4% դեպքերում թեստը տալիս է կեղծ դրական արդյունքներ։
Սակայն որոշ իրավիճակներում ՄԻԱՎ-ի PCR ախտորոշումն անփոխարինելի է: Այն սովորաբար տրվում է կեղծ բացասական ELISA արդյունք ունեցող մարդկանց: Նման ցուցանիշները վկայում են այն մասին, որ մարդու մոտ դեռևս չի առաջացել վիրուսի դեմ հակամարմիններ և դրանք հնարավոր չէ հայտնաբերել առանց քանակի բազմակի ավելացման։ Սա հենց այն է, ինչի կարելի է հասնել PCR արյան թեստ անցկացնելով։
Այս ախտորոշիչները անհրաժեշտ են նաև ՄԻԱՎ վարակակիր մորից ծնված կյանքի առաջին տարվա երեխաների համար։ Մեթոդը երեխայի կարգավիճակը հուսալիորեն որոշելու միակ միջոցն է։
PCR հեպատիտի ախտորոշման համար
Պոլիմերազային շղթայական ռեակցիայի մեթոդը թույլ է տալիս հայտնաբերել հեպատիտ A, B, C վիրուսի ԴՆԹ-ն վարակի դեմ հակամարմինների ձևավորումից կամ հիվանդության ախտանիշների ի հայտ գալուց շատ առաջ: Հեպատիտ C-ի համար PCR անալիզը հատկապես արդյունավետ է, քանի որ դեպքերի 85% -ում այս հիվանդությունը առանց ախտանիշների է և առանցժամանակին բուժումը անցնում է քրոնիկ փուլ։
Ախտածնի ժամանակին հայտնաբերումը կօգնի խուսափել բարդություններից և երկարատև բուժումից:
ՊՇՌ համապարփակ հետազոտություն
Բարդ PCR վերլուծություն. ի՞նչ է դա: Սա հետազոտություն է պոլիմերային շղթայական ռեակցիայի մեթոդով, որը ներառում է ինֆեկցիաների մի քանի տեսակների միաժամանակյա որոշում՝ mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes gonorrllohe 2, տիպի 1 և 2: Նման ախտորոշման գինը տատանվում է 2000-ից 3500 ռուբլի: կախված կլինիկայից, օգտագործվող նյութերից և սարքավորումներից, ինչպես նաև վերլուծության տեսակից՝ որակական կամ քանակական: Ինչ է անհրաժեշտ ձեր դեպքում՝ բժիշկը կորոշի: Որոշ դեպքերում բավական է միայն որոշել հարուցչի առկայությունը, մյուսներում, օրինակ, ՄԻԱՎ վարակի դեպքում քանակական տիտրը կարևոր դեր է խաղում: Վերոնշյալ բոլոր հարուցիչները ախտորոշելիս հետազոտությունը կոչվում է «PCR-12 անալիզ»:
Վերլուծության արդյունքների սղագրություն
PCR վերլուծության վերծանումը դժվար չէ: Ցուցանիշի ընդամենը 2 սանդղակ կա՝ «դրական արդյունք» և «բացասական արդյունք»։ Երբ հայտնաբերվում է պաթոգեն, բժիշկները կարող են 99% վստահությամբ հաստատել հիվանդության առկայությունը և սկսել հիվանդի բուժումը: Վարակի որոշման քանակական մեթոդով համապատասխան սյունակում նշված կլինի հայտնաբերված բակտերիաների թվային ցուցանիշը: Միայն բժիշկը կարող է որոշել հիվանդության աստիճանը և նշանակել անհրաժեշտ բուժում։
Որոշ դեպքերում, օրինակ, ՄԻԱՎ վարակը ՊՇՌ-ով որոշելիս, բացասական արդյունքով, անհրաժեշտ է դառնում լրացուցիչ հետազոտություններ անցկացնել՝ ստացված ցուցանիշները հաստատելու համար։
Որտե՞ղ անցնել թեստը:
Որտե՞ղ անցնել PCR թեստ՝ հանրային կլինիկայում, թե մասնավոր լաբորատորիայում: Ցավոք, քաղաքային բժշկական հաստատություններում սարքավորումներն ու մեթոդները հաճախ հնացած են: Ուստի ավելի լավ է նախապատվությունը տալ ժամանակակից սարքավորումներով և բարձր որակավորում ունեցող կադրերով մասնավոր լաբորատորիաներին։ Բացի այդ, մասնավոր կլինիկայում դուք շատ ավելի արագ արդյունքներ կստանաք։
Մոսկվայում շատ մասնավոր լաբորատորիաներ առաջարկում են PCR վերլուծություն տարբեր վարակների համար: Օրինակ, այնպիսի կլինիկաներում, ինչպիսիք են Vita-ն, Complex Clinic-ը, Happy Family-ը, Uro-Pro-ն, կատարվում է PCR անալիզ։ Քննության արժեքը 200 ռուբլուց է: մեկ պաթոգեն հայտնաբերելու համար։
Կարելի է եզրակացնել, որ վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշումը ՊՇՌ-ով շատ դեպքերում արագ և հուսալի միջոց է վարակի վաղ փուլերում օրգանիզմում հարուցիչը հայտնաբերելու համար։ Բայց, այնուամենայնիվ, որոշ դեպքերում արժե ընտրել այլ ախտորոշիչ մեթոդներ։ Միայն մասնագետը կարող է որոշել նման ուսումնասիրության անհրաժեշտությունը: PCR վերլուծության վերծանումը պահանջում է նաև պրոֆեսիոնալ մոտեցում: Հետևեք ձեր բժշկի խորհուրդներին և մի կատարեք այն թեստերը, որոնք ձեզ պետք չեն։
